隆科生物细胞实验平台为广大科研工作者提供耐药细胞株构建、细胞毒性实验、细胞迁移实验、细胞侵袭实验、细胞流式周期检测、细胞流式凋亡检测、原代细胞提取、鉴定和培养相关服务,此外,还包括细胞实验相关检测及科研服务。平台负责细胞实验开发、细胞样本保存以及构建特定细胞株等相关实验业务。
细胞实验技术服务主要内容:
原代细胞分离实验:
常规细胞培养实验和构建细胞模型,进行形态学、基因水平和蛋白质(组)水平的实验。服务内容:细胞原代培养、细胞传代培养、3D细胞培养。实验周期:视具体实验定。
细胞活力检测(MTT法):
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力。噻唑兰,简称MTT,可透过细胞膜进入细胞内,活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的Formazan结晶并沉积在细胞中,结晶物能被二甲基亚砜(DMSO)溶解,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映细胞数量。
稳定细胞株筛选服务内容和流程:
1)常规细胞:a. 杀伤曲线绘制;b. 转染质粒,铺板,用不同的抗生素浓度筛选细胞单克隆;c. qPCR或Western Blot检测稳定克隆的外源基因表达水平。2)特殊细胞:a. 根据细胞特点、实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户探讨确定实验方案;b. 预实验,通过转染含有GFP报告基因的质粒确定转染试剂,并优化转染条件;c. 杀伤曲线绘制;d. 转染质粒,铺板,用不同的抗生素浓度筛选细胞单克隆;e. qPCR或Western Blot检测稳定克隆的外源基因表达水平。
流式细胞检测:
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒(如微球,细菌,小型模式生物等)逐个进行快速定量分析和分选的技术。该技术广泛的运用于从基础研究到临床实践的各个方面,涵盖了细胞生物学、免疫学、血液学、肿瘤学、药理学、遗传学及临床检验等领域。
细胞转染实验服务内容和流程:
1)质粒:a. 进行预实验,通过转染含有报告基因的质粒优化转染条件;b. 转染条件确定后,按照客户方案进行转染;c. qPCR或Western Blot检测转染效率。2)SiRNA:a. 根据基因序列,设计并合成siRNA;b. 进行预实验,通过转染带有荧光标记的阴性对照siRNA优化转染条件;c. 通过qPCR和Western Blot验证siRNA的沉默效率,筛选siRNA使用浓度。
细胞凋亡实验:
细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用;它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。
原代/传代细胞培养(Primary/continuoua cell culture):
细胞的生长需要营养环境,用于维持细胞生长的营养基质称为培养基。培养基按其物理状态可分为液体培养基和固体培养基。从多细胞生物中分离所需要细胞和扩增获得的细胞以及对细胞进行体外改造,观察,必须解决细胞离体培养问题,同微生物细胞培养的难易相比,比较困难的是来自多细胞生物的单细胞培养,特别是动物细胞的培养。
细胞活力检测(Cell viability test):
活细胞中的脱氢酶能将MTT还原成不溶于水的蓝紫色产物(甲臜,Formazan),并沉淀在细胞中,而死细胞没有这种功能。二甲亚砜(DMSO)能溶解沉积在细胞中的蓝紫色结晶物,溶液颜色深浅与所含的Formazan量成正比,用酶标仪测定OD值。
稳定转染(Stable transfection):
稳定转染或持久的转染是用于建立克隆的细胞系,这种细胞系中转染的目的基因整合到染色体DNA中并指导适量目的蛋白的合成。一般来说(由细胞类型决定),形成稳定转染细胞的效率比瞬时转染的效率低1到2个数量级。利用可选择的遗传标记物有利于从非转染细胞的毕竟中分离出稀少的稳定转染物。
【本公司合作项目】
病理检测:石蜡包埋、切片、HE染色、masson染色、番红固绿染色、天狼星红染色、免疫组化、免疫荧光单标/双标/多标、全景扫描、激光共聚焦拍照等。
分子生物学实验:荧光定量PCR检测、Western blot检测、血常规、生化酶活、ELISA检测等。
细胞实验:耐药细胞株构建、细胞毒性实验、细胞迁移实验、细胞侵袭实验、细胞流式周期检测、细胞流式凋亡检测等。
动物实验:动物模型构建、动物饲养服务、动物临床前研究、药效评价、功能性评价等。
微生物学实验:抑菌试验、药敏试验、菌种鉴定、微生物多态性分析等实验。
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